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                高效率轉(zhuǎn)染N2a小鼠神經(jīng)瘤母細胞的操作方法

                發(fā)布時間: 2021-11-11  點擊次數(shù): 1738次

                轉(zhuǎn)染條件:

                培養(yǎng)板:6孔板

                轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA大小: 6000bp

                轉(zhuǎn)染試劑用量:10ul

                核酸用量:電訊

                轉(zhuǎn)染時間:48小時

                轉(zhuǎn)染試劑:Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑(AD600150)

                培養(yǎng)基:Z7181-500 胎牛血清

                細胞凍存:CE70100T無血清細胞凍存液


                操作步驟:

                提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

                核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

                在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

                細胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

                分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。


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