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                乙醇沉淀法

                發(fā)布時(shí)間: 2021-12-17  點(diǎn)擊次數(shù): 4300次

                原理

                DNA 溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會(huì)奪DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混 合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因?yàn)闊o水乙醇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時(shí),就會(huì)影響收得率。折中的做法初次沉淀DNA時(shí)可用95%乙醇代替無水乙醇,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

                材料與儀器

                DNA
                乙酸鈉 乙醇
                EP管 低溫離心機(jī) 移液器 -70度冰箱

                步驟


                1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內(nèi)切酶和配套Buffer。
                 
                2. 在離心管中加入如下成分:
                10xBuffer   1ul
                待切樣品   xul
                酶      0.5-1ul
                ______________________
                加水補(bǔ)足10ul
                 
                3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。
                 
                4. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr,若待切樣品為PCR 產(chǎn)物,則可將反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)延長。
                 
                5. 用未酶切的質(zhì)粒作為對(duì)照,瓊脂糖電泳鑒定酶切結(jié)果。
                 
                注:當(dāng)酶切樣品用于回收而不是鑒定時(shí),可按比例適當(dāng)加大反應(yīng)體積。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer 或者通用Buffer,但要注意不能有星反應(yīng)。


                注意事項(xiàng)

                移去上清液時(shí)需要緩慢操作,以免將DNA樣品弄出。

                常見問題

                乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。

                以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。


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