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                轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)選擇什么PCR酶?

                發(fā)布時間: 2022-06-08  點(diǎn)擊次數(shù): 1466次

                轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)選擇什么PCR酶

                1. Taq酶
                2. 高保真酶


                這取決于你的克隆方案,是用平末端還是粘性末端。

                如果后續(xù)克隆用平末端連接,可以使用高保真酶,產(chǎn)生的末端就是就平末端,進(jìn)行平末端連接。

                如果后續(xù)克隆用粘性末端,使用普通的Taq酶就可以了。Taq會在產(chǎn)物末端多帶一個A尾巴,對應(yīng)的載體是帶T尾巴的T載體。

                如果在引物設(shè)計(jì)上,在PCR產(chǎn)物末端引入一些酶切位點(diǎn)序列,那么尾巴就會更長。加入尾巴時應(yīng)考慮目的基因插入載體的方向,設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)序列尾巴。如果尾巴設(shè)計(jì)反了,插入的目的基因也是反方向的,就無法起效。



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