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                Nunc細胞工廠

                發(fā)布時間: 2023-01-11  點擊次數(shù): 1253次

                原理

                用培養(yǎng)液制備細胞懸液,將懸液注入單元的各小室內(nèi)。使長邊朝下,放置。將單元旋轉(zhuǎn) 90度,放平后用 CO2 充氣。然后封閉,進行培養(yǎng)。

                材料與儀器

                單層細胞 0.25%天然胰蛋白酶 D-PBSA
                生長培養(yǎng)液
                Nunc細胞工廠 硅酮管和連接器 血細胞計數(shù)板或電子細胞計數(shù)器和計數(shù)用液體

                步驟

                1. 用胰蛋白酶消化后,將細胞懸浮,計數(shù)細胞,用 2 L 培養(yǎng)液將懸液稀釋至細胞密度為 2x104 個/ml。

                2. 使小室長邊朝下,放置,將培養(yǎng)液供應(yīng)管與 Luer 連接管相接,再通過供應(yīng)管與底孔連通。

                3. 經(jīng)供應(yīng)管加入細胞和培養(yǎng)液。所有培養(yǎng)小室內(nèi)的液體將達到相同水平。

                4. 按單層細胞平面將小室轉(zhuǎn)動 90度,使單元的短邊朝下,放置,使進孔和供應(yīng)管朝上。

                5. 在 Luer 連接管處,中斷供應(yīng)管與培養(yǎng)液儲存器的連接。

                6. 與細胞單層平面垂直,將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)動 90度,以底部放平,使培養(yǎng)面呈水平位。

                7. 用 5% CO2 空氣向單元充氣 5 min,然后夾住供應(yīng)管和出口。如果需要,可連續(xù)充氣。

                8. 倒掉供應(yīng)管和出口內(nèi)的培養(yǎng)液,然后將單元移入培養(yǎng)箱。

                9. 更換培養(yǎng)液(或收集培養(yǎng)液)時,按步驟 6 的相反程序操作。除去輸入管上的濾器,然后按步驟 4 相反程序操作。

                10. 擦洗 Luer 連接管,松開夾具,使培養(yǎng)液流出。

                11. 按步驟 2~8 更換培養(yǎng)液。

                12. 收集細胞。

                (a)按步驟 9 和步驟 10 除去培養(yǎng)液。

                (b)加入 500 ml D-PBSA,然后除去。

                (c)加入 4℃的 500 ml 胰蛋白酶,30 s 后除去。

                (d)用剩余的胰蛋白酶將細胞消化 15 min。

                (e)加入培養(yǎng)液,搖動培養(yǎng)小室,使細胞懸浮。

                (f)按步驟 9 和步驟 10 取出含細胞的培養(yǎng)液。

                13. 殘留細胞可用于接種下一批細胞,雖然這種方法難以控制接種密度。最好是將培養(yǎng)小室丟棄,用新的小室重新開始培養(yǎng)。


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