細(xì)胞計(jì)數(shù)在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中是非常常見的，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室目前使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，細(xì)胞計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)如下圖所示：

實(shí)驗(yàn)步驟

1.所用細(xì)胞密度達(dá)到一定要求后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)鋪板，提前準(zhǔn)備好細(xì)胞計(jì)數(shù)板、蓋玻片、計(jì)數(shù)器；

2.棄掉原有培養(yǎng)基，加入1ml溫浴的PBS緩沖液清洗；

3.棄掉PBS緩沖液，加入胰酶消化細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型及日常經(jīng)驗(yàn)決定；

4.消化相應(yīng)時(shí)間后，加入二倍體積的培養(yǎng)基終止消化，用移液器將細(xì)胞全部吹下，轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)；

5.離心機(jī)室溫800rpm,離心5min；

6.準(zhǔn)備和所計(jì)數(shù)細(xì)胞種類相同的1.5ml Ep管，各加入PBS緩沖液980ul備用；

7.準(zhǔn)備細(xì)胞計(jì)數(shù)板，并在計(jì)數(shù)區(qū)蓋上蓋玻片；

8.將5中離心結(jié)束的細(xì)胞棄上清，加入1ml培養(yǎng)基，充分混懸后取20ul加入到6中的Ep管中，充分顛倒混勻后取12ul加入牛鮑計(jì)數(shù)板一側(cè)的計(jì)數(shù)區(qū)內(nèi)，保證計(jì)數(shù)區(qū)充盈。

9.低倍顯微鏡（物鏡4）下找到計(jì)數(shù)視野，上圖中“"B C D E“"區(qū)為細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)。

10.高倍鏡（物鏡10）下計(jì)數(shù)細(xì)胞，依次計(jì)數(shù)4個(gè)方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量。

11.計(jì)算細(xì)胞數(shù)量，假設(shè)4個(gè)方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)為A,則每ml的細(xì)胞數(shù)量為：A/4×104×50（稀釋倍數(shù)）=B個(gè)。

12.假設(shè)鋪板所需細(xì)胞密度為1×104個(gè)/ml，則所需8中的細(xì)胞混懸液的量為：1×104×C（培養(yǎng)基所需毫升數(shù)，如6孔板每孔加培養(yǎng)基2ml）/B=D ml，最后換算成μl即可。

13.鋪板：取C ml培養(yǎng)基，加入8中細(xì)胞混懸液D μl，充分混勻后依次加入培養(yǎng)皿中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)即可。

4.細(xì)胞混懸液加入細(xì)胞計(jì)數(shù)板時(shí)，建議使用10μl小槍頭、2-20μl移液器，槍頭傾斜抵住蓋玻片邊緣，緩慢加入，務(wù)必保證細(xì)胞混懸液全部加入，計(jì)數(shù)區(qū)充盈。

關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)，以如下實(shí)例來充分理解上述計(jì)算過程：

4.鋪板：培養(yǎng)基5孔（為防止不夠所以多準(zhǔn)備1孔）2ml×5孔=10ml加入細(xì)胞混懸液800μl，混勻加入六孔板即可。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖饕鞘袚碛斜姸嗟暮献骰锇椋才嗌锓浅s幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。