一、miRNA的合成途徑
在動(dòng)物細(xì)胞核中，miRNA基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Pri-miRNA（長(zhǎng)度大約為300～1000 nt）被RNase IIl-Drosha 酶切割成為發(fā)夾結(jié)構(gòu)前體 miRNA（Pre-miRNA，長(zhǎng)度大約為70～100nt）。經(jīng)過(guò)初步剪切后，Pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin-5的作用下由細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，然后由另一種RNase Ill-Dicer 酶進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟的miRNA（長(zhǎng)度大約為21～23 nt）。成熟的miRNA與類(lèi)似RISC的核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體，從而引起靶mRNA降解或者翻譯抑制。miRNA參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡、免疫調(diào)節(jié)以及物質(zhì)代謝等過(guò)程。

植物miRNA的形成過(guò)程全部是在細(xì)胞核中完成的，不存在Pre-miRNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。首先，細(xì)胞核中編碼miRNA的基因在RNA聚合酶II的作用下轉(zhuǎn)錄形成Pri-miRNA，然后在Dicer酶-DCL1的作用下形成Pre-miRNA，DCL1繼續(xù)作用于Pre-miRNA從而形成成熟的miRNA，以上過(guò)程均在細(xì)胞核中完成。成熟的miRNA或者是在細(xì)胞核中與類(lèi)似RISC的核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體，然后被核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HST運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中，或者是先被HST運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中，再與核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-RISC復(fù)合體。miRNA影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育、激素的調(diào)節(jié)、信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、植物病害和應(yīng)答環(huán)境脅迫。

二、miRNA的特性

miRNA最典型的特性就是兩點(diǎn)--保守性和特異性。

·保守性

miRNA的結(jié)構(gòu)和序列在物種之間幾乎保持不變。

結(jié)構(gòu)的保守性：無(wú)論動(dòng)物體還是植物體，miRNA的生成途徑都是由莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體切割成為成熟體；

序列的保守性：miRNA的序列在不同物種中的差距極小。

·特異性

miRNA的表達(dá)分布具有時(shí)間區(qū)別和空間區(qū)別。

時(shí)間的特異性：在個(gè)體不同的發(fā)育階段，miRNA的表達(dá)量不同；

空間的特異性：在個(gè)體的不同組織中，miRNA的表達(dá)量不同。

三、miRNA序列查找

常用的查找miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)--miRBase和TarBase。

該數(shù)據(jù)庫(kù)提供已發(fā)表的miRNA序列，注釋查詢(xún)，定位，發(fā)卡序列以及命名服務(wù)等信息的數(shù)據(jù)庫(kù)。

該數(shù)據(jù)庫(kù)人工搜集了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)的miRNA的靶基因，包括在人、小鼠、果蠅、蠕蟲(chóng)和斑馬魚(yú)中的miRNA的靶基因。

四、miRNA產(chǎn)品選擇指南

Vazyme 為您提供miRNA專(zhuān)用的提取、逆轉(zhuǎn)錄、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)以及SmallRNA建庫(kù)系列產(chǎn)品，并搭配最適miRNA引物設(shè)計(jì)軟件，可直接進(jìn)行成熟miRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR高效檢測(cè)，及Small RNA的文庫(kù)構(gòu)建。

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