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單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
更新時(shí)間：2025-01-13
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廠商性質(zhì)：代理商
生產(chǎn)地址：
單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
產(chǎn)品介紹：
1. 產(chǎn)品描述：
信勵(lì)致和®單片段無縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進(jìn)行片段重組，可快速將單個(gè)片段定向克隆到任意線性化載體中。本試劑盒含有的2×單片段無縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進(jìn)行重組連接，最終得到的無缺口閉環(huán)質(zhì)粒可直接轉(zhuǎn)化，完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點(diǎn)的限制，僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線性化載體的末端序列，使得插入片段5' 端和3' 端帶有線性化載體兩端一致的序列（15~25 bp），即可實(shí)現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進(jìn)行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR 產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法，數(shù)小時(shí)內(nèi)即可完成從DNA樣品準(zhǔn)備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。
2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：
（1）無需考慮酶切位點(diǎn)，基于序列同源性反應(yīng)15 min即可實(shí)現(xiàn)載體與片段的快速重組。
（2）插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一，無需純化，可直接與載體進(jìn)行重組反應(yīng)。
（3）可以選擇性進(jìn)行 5 min快速轉(zhuǎn)化 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞。
單片段無縫克隆試劑盒（克隆突變）
使用說明：
1. 產(chǎn)品組分：
組分/含量 | AB0141 | AB0142 |
2×單片段無縫克隆混合液 | 250 μL | 500 μL |
500 bp平末端對(duì)照片段(20ng/μL) | 5 μL | 5 μL |
pUC19線性化載體(50 ng/uL) | 5 μL | 5 μL |
2. 儲(chǔ)運(yùn)條件：
-25~-15℃存儲(chǔ)，有效期12個(gè)月，干冰運(yùn)輸。
3. 注意事項(xiàng)：
（1）片段擴(kuò)增用模板、引物、線性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細(xì)胞、ddH2O需要自備。
（2）重組產(chǎn)物冰上冷卻后，可直接轉(zhuǎn)化化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。
（3）純化或回收的載體或目的片段品質(zhì)較差會(huì)顯著降低克隆陽性率。
（4）菌落少時(shí)，建議轉(zhuǎn)化時(shí)適當(dāng)增加重組產(chǎn)物的量，或者增加菌液涂布量。
（5）隨著重組質(zhì)粒長(zhǎng)度的增加，克隆效率降低。
